猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)是猪细小病毒科的ssDNA病毒，PPV感染主要引起初产母猪和经产母猪出现不孕、流产、产死胎、木乃伊胎和重复返情等繁殖障碍[1]，繁殖障碍的严重程度取决于毒株的致病性和母猪所处的妊娠期。在母猪妊娠30 d内感染，主要导致胚胎死亡或被母体重吸收；妊娠30～70 d，主要表现为流产、产死胎、木乃伊胎；妊娠70 d后感染，一般不引起病害，母猪多能正常产仔，但这些仔猪常常带有抗体并长期带毒。PPV毒株大致分为4种类型：①以NADL-2为代表的弱毒株，感染妊娠母猪后无法经胎盘感染胎儿，被用作弱毒疫苗株；②以NADL-8为代表的强毒株，感染血清阴性母猪后，引起病毒血症，并跨越胎盘屏障感染胎儿并致死；③以Kresse株为代表的皮炎型强毒株；④肠炎型毒株，主要引起肠道病变[2]。近年来，随着规模化养猪业的迅速发展，PPV感染日益严重，不同年龄、品系、性别的家猪和野猪均可感染。病猪和带毒猪是主要传染源，通过口、鼻分泌物和排泄物向外排毒。PPV在全球范围内普遍流行，瑞典、克罗地亚等欧洲国家在家猪、野猪均检出PPV[3-4]；泰国、韩国等亚洲国家也相继报道了PPV的感染情况[5-6]；我国河南、四川、贵州等地区PPV均出现不同程度的感染[7-8]。感染PPV的母猪无明显的临床症状，且疫苗免疫后也无法阻止病猪排毒，猪细小病毒的广泛传播及隐性感染[9]，给养猪业造成了严重的危害。为深入了解湖北地区PPV的流行特点，笔者于2018—2019年从湖北省5个地级市的规模化猪场收集出现繁殖障碍症状和有繁殖障碍史猪群的病料共1 407 份，采用笔者所在课题组建立的巢式PCR法对PPV进行调查，并分析不同地区、年龄段、季节及与其他繁殖障碍性疾病混合感染的情况，以期为PPV的防控提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 样品采集2018—2019年，1 407 份被动送检样品，采自湖北省荆州、随州、黄冈、恩施、咸宁5个地区的规模化猪场，临床上出现繁殖障碍症状的母猪及其所产仔猪和有繁殖障碍史猪群。其中，荆州235份、随州414份、黄冈270份、恩施187份、咸宁301份，样品置于冰上保存运输至实验室，并于24 h内完成后续检测。

1.2 样品预处理及病毒DNA提取样品预处理参照文献[10]方法，具体步骤如下：取1 mL猪全血置于1.5 mL EP管中，1 500 r/min 离心30 min，取上清，预处理样品用于后续病毒DNA提取。样品病毒DNA提取采用Axygen体液提取试剂盒，具体步骤参照试剂盒说明书进行。用Nanodrop1 000检测所提取DNA的浓度和纯度，将DNA于-20 ℃下条件保存备用。

1.3 病原学检测采用巢式PCR法对样品进行病原学检测。引物序列如表1所示。同时，采用猪细小病毒PCR检测试剂盒进行复检，具体步骤参照试剂盒说明书进行。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences引物Primers序列Primer sequences (5′-3′)片段大小Product size∥bp参考文献ReferencesPPV-OF为5′-TAAAGTTAGAATAGGATGCGAGGAA-3′,R为5′-TGCTGCGGCG TCTGATGGA -3′716[11]PPV-IF为5′-AAACTGCCAG GTGATTT -3′,R为5′-TCCACGGCTC CAAG -3′286PRV-O F为5′-GCTCGCCCTCGTCAGCAAC-3′,R为5′-AACACGCGCACGCAGAGAGT-3′499[12]PRV-I F为5′-GCGTGTACTGCGACTGCGTGTT-3′,R为5′- CGACCTGGCGTTTATTAACCGAGA -3′356PRRSV-OF为5′-AATCTTGARGAATGCTTGGC-3′,R为5′-GCTGAGTAYTTTGGGCGTG-3′1 034[13]PRRSV-IF为5′-TTCTTTGATTGGRATGTTGTGC-3′,R为5′-CAAGGAGCTGCTTGAYGACAC-3′1 029PCV2-OF为5′-CATCTTCAACACCCGCCTCT-3′,R为5′-GGATATTGTATTCCTGGTCGTAT-3′518[14]PCV2-IF为5′-GGGCGGTGGACATGATGAGAT-3′,R为5′-GGTTATGGTATGGCGGGAGGA-3′254注：引物名称中“O”表示巢式PCR法的外侧引物，“I”表示内侧引物Note：“O” indicated the outer primer and “I” indicated the inner primer of the nested PCR in the name of the primer

1.4 数据统计与分析对不同地区、年龄段、不同季节及混合感染的检测结果，采用SPSS 24.0软件中的卡方检验进行差异显著性分析，P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著。通过Origin 2019软件对检测样品的PPV感染率进行处理分析。

2 结果与分析

2.1 不同地区PPV的检测结果不同地区规模化猪场PPV的检测结果(表2)显示，PPV阳性样品数为235份，平均阳性率为16.70%(235/1 407)。其中恩施地区PPV阳性率最高，为30.48%(57/187)；其次为咸宁、黄冈、荆州地区，阳性率分别为20.60%(62/301)、17.41%(47/270)和14.04%(33/235)；随州地区最低，为8.70%(36/414)，不同地区间PPV阳性率差异显著(P<0.05)。结果表明，荆州、随州、黄冈、咸宁、恩施5个地区规模化猪场均有不同程度感染，而恩施地区的感染尤为严重。

2.2 不同年龄段猪群PPV的检测结果对不同年龄段猪群PPV的感染情况进行分析，其中育肥猪的阳性率最高，为30.95%(65/210)，其次是后备猪和初产母猪，阳性率分别为17.97%(78/434)和15.71%(55/350)，而经产母猪、0～30日龄仔猪的阳性率较低，分别为9.05%(21/232)和8.84%(16/181)，不同年龄段猪群间PPV阳性率差异显著(P

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